تقدير البروتين الخام فى المواد الغذائية

محمد فؤاد

محمد فؤاد

عدد المساهمات : 2522
تاريخ التسجيل : 26/03/2010

طبعا أنا أعتبرها من أهم طرق التحليل في مجال الاغذية لعدة أسباب
منها أنها طريقة قديمةو طويلة و لاتوجد طريقة على حد علمي تنازعها في الدقة و الخطورة أحيانا - علي المشتغل طبعا- والسبب الاهم في رأيى انها مرت بمراحل تطويل كثيرة من أستخدام عوامل الحفز الي طرق التقطير والمعايرة التي قد تكون مباشر أو عكسية قبل أن أستطرد في الشرح أضع فيديو الاول لجهاز وحدة الهضم أصابنى فعلا بالاحباط .

https://www.youtube.com/watch?v=ZDuKT9fBNjo&feature=related

والثاني لشرح بعض أجزاء جهاز التقطير

https://www.youtube.com/watch?v=Hz0-THJGxrM&feature=related

محمد فؤاد

محمد فؤاد

عدد المساهمات : 2522
تاريخ التسجيل : 26/03/2010

تقدير البروتين الخام فى المواد الغذائية

(طريقة كلداهل Kjeldahl method)

البروتين الخام يشمل البروتين الحقيقى وغير الحقيقى مثل الأميدات واليوريا وغيرها من المركبات النتروجينية اللابروتينية ولذلك يطلق عليها كلها إسم (البروتين الخام). البروتين عادة يحتوى على 16% من وزنه نتروجين أى أن كل 1 جم نتروجين يدخل فى تكوين100/16 = 6.25 جم بروتين خام.
تقدير النتروجين الكلي

==============

تحضير العينة

----------- يتم فصل اللحم كليا عن العظم وتفرم اللحم في المفرمة مرتين ثم تخلط جيدا وتوضع في عبوات مناسبة تملا العبوة بالكامل وتقفل باحكام وتحفظ لمنع فسادها اوتغيير في التركيب وتحلل العينة في خلال 24 ساعة

طريقة الاختبار
=========
توضع وزنة 2.2جم من العينة السابقة في دورق كلداهل سعة 500- 800مل (دورق الهضم )ثم يضاف 0.7جم اكسيد زئبق خالي من النتروجين و 15 جم من مسحوق كبريتات البوتاسيوم اللامائية ويضاف 25 مل من حمض كبريتيك مركز 93-98%خالي النتروجين
(اذا كانت العينة اكبر من 2.2جم يزاد 10مل حامض كبريتيك لكل جرام من العينة
ويوضع الدورق علي جهاز الهضم ويستمر في الغليان لمدة 30دقيقة حتي يصير المحلول رائق بعد ذلك يرفع الدورق ليبرد لاقل من 25درجة مئوية
يضاف 200مل ماء ثم يضاف بضع من حبيبات الزنك ثم بعد ذلك يثبت الدورق في جهاز التقطير ويضاف 80مل محلول هيدروكسيد صوديوم (يذاب 450جم من الصودا الكاوية +40جم كبريتيد صوديوم ويخفف بالماء الي ان يصبح الحجم لتر )ويجب ان تكون نهاية المكثف مغمور في محلول الحمض القياسي مضاف الية 5-7 نقط من دليل (احمر الميثيل والبروموكريزول الاخضر بذاب 0.16جم من احمر الميثيل -0.83جم دليل بروموكريزول الاخضر في لتر ايثانول )يرج دورق التقطير جيدا يسخن حتي يتطاير كل المركبات النوشادرية وتكثف ويجب استقبال 150مل علي الاقل
يرفع دورق الاستقبال وتغسل نهاية المكثف ثم يعادل النتروجين في دورق الاستقبال بمحلول حمض هيدروكلوريك 1عياري
الحسابات
======
النتروجين مقدرا بالمليجرام نتروجين لكل 100جرام لحم = عدد مليلترات الحمض المستخدم ×1.4 ×100علي وزن العينة
http://labtech-sy.com/files/products/prod_1258985191.jpg

محمد فؤاد

محمد فؤاد

عدد المساهمات : 2522
تاريخ التسجيل : 26/03/2010

السبب هو بعض المقارنات .. ما كنا نعمل بة فى..... وما يعملون بة... دنا كنت بحارب الكون عشان نانو كلر ولمينا وأوتو كاونتر و............ وأعتقد تفهم قصدي يابشمهاندس جمال وياريت تشرفنا بالشرح وأنا سوف أقدم بعدك إن شاء الله الطريقة المعتمدة حاليا بمصر خاصة في اللحوم وهي التى يستخدم فيها البوريك أسد ولدي بعض الاستفسارات خاصة في الطريقة القديمة إن شاء الله بمجرد ما أخلص أمتحان ليسن القيادة هذا الاسبوع ...بالنسبة للأخ العزير نهاد فعلا طريقة Dye Binding Method موجودة ولكن أصارحك القول أن أستخدامات الأسبكترو والأجهزة الضوئية عموما في مختبرات المصانع نادرة إن لم تكن موجودة لأسباب كثيرة مادية وفنية ...وننتظر شييء من خبرتك بأذن الله في هذا المجال.

التالي كتابين جيدين جدا
http://oron.com/cpfk0fnzz364/FA1441914773.rar.html (http://oron.com/cpfk0fnzz364/FA1441914773.rar.html)

http://www.mediafire.com/?y0mmh5jqmzy (http://www.mediafire.com/?y0mmh5jqmzy)

و هذا كمان
http://www.4shared.com/document/yahaPhx4/Handbook_of_Food_Analysis_Inst.htm (http://www.4shared.com/document/yahaPhx4/Handbook_of_Food_Analysis_Inst.htm)

--------------------------------------------------------------------------------

جمال عبد العظيم19-10-2010, 09:25 PM
http://2.bp.blogspot.com/__YHt_Ei9nuQ/Sqh7iQh2cxI/AAAAAAAAAIs/CSlypTsIVXU/s400/elisa3.jpg
احدى الطرق التى تستخدم اما لتحديد نسبة انتيجين مجهول فى العينة (الطريقة المباشرة) او تحديد نسبة أجسام مضادة فى العينة ( الطريقة غير المباشرة )
تستخدم بصورة كبيرة فى تحاليل المناعة والهرمونات وكذلك الفيروسات

* طريقة الاليزا المباشرة Direct Elisa

فى الاليزا عادة نستخدم أطباق الاليزا وهو طبق مكون من صفوف وكل صف مكون من 8 ويلات (نقرات) وعاة يكون الطبق 96 ويل

فى الطريقة المباشرة نبحث عن أنتجين مجهول

2- تكون جدران الويلات مغطاة بالاجسام المضادة الخاصة بالانتيجين المراد الكشف عن وجودة
3- عند اضافة العينة الى الويل تقوم الاجسام المضادة الموجودة على جدران الويل بالارتباط بالانتيجن اذا وجد فى العينة
4- يتم غسيل الويل للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة والانتيجنات الاخرى الغريبة ويتبقى الانتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود على جدار الويل
(antibody antigen complex) يسمى الجسم المضادالمرتبط بالانتجين (معقد الانيجين والجسم المضاد
يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل هذا الجسم المضاد الثانى مع مع معقد الانتيجين والجسم المضاد
تكرر عملية الغسيل مرة أخرى للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة
يتم اضاف الخطوة الاخيرة وهو مركب (substrate or tmb) يقوم الانزيم المرتبط فى الجسم المضاد الثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لون
يتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمىStop solution
يتم القراءة على جهاز قراءة الاليزا عند الطول الموجى المناسب

http://1.bp.blogspot.com/__YHt_Ei9nuQ/Sqh6_7OjgkI/AAAAAAAAAIk/CtezcoVFELQ/s320/images.jpeg

تتناسب قوة امتصاص هذا اللون مع تركيز الانيجين المجهول فى العينة

ويأتى مع كل كيت اليزا عدة استاندرات (6 غالبا) بتركيزات متدرجة معلومة يتم عمله مع الاختبار المطلوب ثم يتم رسم منحنى قياسى يمثل concentrationوالتركيز absorbanceالعلاقة بين قوة الامتصاص
ويتم حساب النتائج من هذا المنحنى
* طريقة الاليزاغير المباشرة In Direct Elisa

نفس خطوات الاليزا المباشرة ولكن فى هذة الطريق نبحث عن الاجسام المضادة المجهولة فى العينة فتكون جدران الويلت مغطاة بالانتيجنات الخاصة بالاجسام المضادة المراد الكشف عنها وباقى الخطوات هى نفسها ولعل اشهر الامثلة لهذا النوع الاليزا الخاصة بالكشف عن الاجسام المضادة بفيروس س
http://3.bp.blogspot.com/__YHt_Ei9nuQ/Sqh8GPKoauI/AAAAAAAAAI8/xqCGt9UJW2I/s400/elisa_2.jpg
http://1.bp.blogspot.com/__YHt_Ei9nuQ/Sqh8cJKKYkI/AAAAAAAAAJM/V4BYWsNa-LI/s200/micrrotiterplatejpg.jpg

تقدير البروتين الخام فى المواد الغذائية

1 تقدير البروتين الخام فى المواد الغذائية الثلاثاء نوفمبر 02, 2010 10:00 pm

محمد فؤاد

2 رد: تقدير البروتين الخام فى المواد الغذائية الثلاثاء نوفمبر 02, 2010 10:00 pm

محمد فؤاد

3 رد: تقدير البروتين الخام فى المواد الغذائية الثلاثاء نوفمبر 02, 2010 10:01 pm

محمد فؤاد